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看完本篇你就知道該如何使用MPbio土壤提取試劑了
釋出時間•☁:2021-10-05   點選次數•☁:520次
  MPbio土壤提取試劑可在30分鐘之內₪╃☁▩,快速◕│••▩、有效地從土壤以及其他環境樣品中提取基因組DNA│╃。適用於從土壤中的所有生物包括G+細菌◕│••▩、酵母菌◕│••▩、真菌◕│••▩、藻類◕│••▩、線蟲類甚至真細菌的孢子◕│••▩、芽孢中提取基因組DNA│╃。
 
  而且它還可以提取其他環境樣品的DNA₪╃☁▩,如沉積物◕│••▩、排洩物◕│••▩、廢水◕│••▩、雪水等│╃。只需500mg的樣品即可得到足夠的DNA│╃。
 
  實驗原理為用特殊的裂解介質E處理樣品₪╃☁▩,之後使用自旋過濾器基於矽吸附DNA原理的GENECLEAN?步驟進行純化₪╃☁▩,得到的DNA可用於PCR◕│••▩、限制性酶切◕│••▩、電泳及其他下游實驗│╃。
 
  很多使用者對於MPbio土壤提取試劑的提取方法不是很清楚₪╃☁▩,特別是對於沒有儀器的情況下₪╃☁▩,更是感到無從下手│╃。
 
  為了解決使用者的煩惱₪╃☁▩,特整理了MPbio土壤提取試劑的提取方法₪╃☁▩,分享給大家₪╃☁▩,只需按照步驟操作₪╃☁▩,即使沒有儀器的情況下₪╃☁▩,也可以快速提取土壤DNA!
 
  1◕│••▩、稱取0.3g~0.4g樣品加入LysingMatrixETube中│╃。(注意•☁:需保證加完樣品及所需溶液後₪╃☁▩,管中應留出不少於200μL空間)
 
  2◕│••▩、加入978μLSPB₪╃☁▩,加入122μLMTBuffer│╃。
 
  3◕│••▩、蓋緊LysingMatrixETube的蓋子₪╃☁▩,將離心管置於渦旋混合儀上₪╃☁▩,對管內物質進行震盪破碎均質化₪╃☁▩,時間設定為40s~50s│╃。(注意•☁:時間不可過長₪╃☁▩,有可能打斷基因組DNA片段降低提取質量)從各個角度都可以震盪一下₪╃☁▩,不要光是底部│╃。
 
  4◕│••▩、在8000r/min轉速下離心15min₪╃☁▩,有利於去除體積較大或具有複雜細胞壁結構的樣品碎屑│╃。
 
  5◕│••▩、將上清液用大口槍頭吸出轉入1.5mL的微離心管中₪╃☁▩,加入250μLPPS₪╃☁▩,手持離心管晃動10次以混勻│╃。
 
  6◕│••▩、在8000r/min下離心5min₪╃☁▩,用大口槍頭將上清液轉移至5mL離心管中│╃。
 
  7◕│••▩、搖勻BindingMatrix後₪╃☁▩,吸取1.0mL加入上一步離心管中│╃。
 
  8◕│••▩、將離心管上下顛倒2min後₪╃☁▩,靜置3min₪╃☁▩,使DNA附著於BingdingMatrix上₪╃☁▩,並等待二氧化矽基質沉澱│╃。(這一步根據沉澱情況時間可以適當延長)
 
  10◕│••▩、將剩餘的上清液與沉澱物重新混勻₪╃☁▩,吸取約600μL混合液移入SPINFilter中₪╃☁▩,8000r/min下離心1min│╃。
 
  11◕│••▩、倒掉收集管中的液體₪╃☁▩,重複上一步操作直至5mL離心管中的液體吸盡│╃。
 
  12◕│••▩、加入已製備好的SEWS-M溶液500μL₪╃☁▩,用小槍頭小心混勻後₪╃☁▩,8000r/min下離心1min後₪╃☁▩,棄去收集管中的液體│╃。
 
  13◕│••▩、為更好的去除雜離子₪╃☁▩,重複第12步₪╃☁▩,更換為1.5mL離心管│╃。
 
  14◕│••▩、在8000r/min下離心2min₪╃☁▩,去除殘留的SEWS-M溶液₪╃☁▩,然後更換為乾淨的1.5mL離心管│╃。(若發現殘餘溶液較多₪╃☁▩,可重複此步驟)
 
  15◕│••▩、在室溫下₪╃☁▩,將SPINFilter風乾5min│╃。(時間可以更久一些)
 
  16◕│••▩、往SPINFilter加入80μLDES溶液₪╃☁▩,用小槍頭小心使之與BindingMatrix混勻₪╃☁▩,65℃水浴15min(有利於DNA的溶出)│╃。8000r/min下離心2min₪╃☁▩,可得到約50μL的DNA溶液│╃。再加入80μLDES溶液重複第16步操作₪╃☁▩,一共可得到約100μL的DNA溶液│╃。
 
  17◕│••▩、棄去SPINFilter₪╃☁▩,將提取好的DNA存於-20℃冰箱儲存│╃。

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