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Wako,質譜級賴氨醯肽鏈內切酶

  • 型   號│▩·☁:125-05061
  • 價   格│▩·☁:
  • 更新時間│▩·☁:2022-06-03
  • 廠家性質│▩·☁:經銷商

125-05061☁▩◕✘▩,質譜級賴氨醯肽鏈內切酶Lysyl Endopeptidase®產品簡介│▩·☁:
產品品牌│▩·☁:Wako
產品名稱│▩·☁:質譜級賴氨醯肽鏈內切酶LysylEndopeptidase®
產品貨號│▩·☁:125-05061
產品規格│▩·☁:20 ug×5
質譜級賴氨醯肽鏈內切酶

125-05061☁▩◕✘▩,質譜級賴氨醯肽鏈內切meiLysyl Endopeptidase®

125-05061☁▩◕✘▩,質譜級賴氨醯肽鏈內切meiLysyl Endopeptidase®產品簡介│▩·☁:

產品品牌│▩·☁:Wako

產品名稱│▩·☁:質譜級賴氨醯肽鏈內切meiLysylEndopeptidase®

產品貨號│▩·☁:125-05061

產品規格│▩·☁:20 ug×5

Wako,質譜級賴氨醯肽鏈內切酶

 本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解mei即賴氨醯肽鏈內切mei☁▩◕✘▩,該mei可以特異性切除賴氨suan基團C末端的多肽☁▩◕✘▩,可用於蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的mei合成↟₪。若同時使用賴氨醯肽鏈內切mei和胰mei☁▩◕✘▩,可更好地切斷賴氨suan基團的多肽☁▩◕✘▩,增加多肽的數量↟₪。產品已按照使用習慣做成小包裝☁▩◕✘▩,是方便使用的冷凍乾燥品↟₪。20 μg/支可用於100-200個樣品的凝膠內消化↟₪。

來源│▩·☁:細菌

外觀│▩·☁:凍乾粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩衝液☁▩◕✘▩,pH8)

活性│▩·☁:0.03~0.07 AU/vial

分子量│▩·☁:27,000(瓊脂糖過濾)☁▩◕✘▩,30,000(SDS-PAGE)

溶解性│▩·☁:溶於水或緩衝液

穩定性│▩·☁:溶解於 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩衝液中☁▩◕✘▩,可在4℃穩定儲存2年;在 pH 值 6.0-11.0↟·││☁、30℃時能穩定儲存☁▩◕✘▩,但溫度超過50℃時不穩定↟₪。

最適pH值│▩·☁:9.0~9.5

等電點│▩·☁:6.9~7.0

底物特異性│▩·☁:

可水解底物——Tos-Lys-OMe↟·││☁、Bz-Lys-NH2↟·││☁、Bz-Lys-pNA↟·││☁、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2↟·││☁、Bz-Arg-pNA↟·││☁、Arg-pNA

抑制劑│▩·☁:DFP↟·││☁、PMSF↟·││☁、TLCK

特點

●  高特異性↟·││☁、高蛋白質消化率↟·││☁、適用於蛋白質譜分析

●  提高裂解效率↟·││☁、增加肽段數量

●  根據使用量特意製備小包裝☁▩◕✘▩,方便使用

應用

  分別採用胰蛋白mei(Tp)↟·││☁、賴氨醯肽鏈內切mei(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內mei切的效果比較↟₪。

  牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)透過 SDS-PAGE 獲得☁▩◕✘▩,然後分別用 Tp↟·││☁、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行mei切☁▩◕✘▩,再用 MALDI-TOFMS 法進行分析↟₪。

  這些蛋白mei的實驗效果見下表↟₪。

表 1│▩·☁:Tp↟·││☁、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照

這些結果表明 Lys-C mei解的錯誤裂解率*↟₪。Tp mei解時加入 Lys-C 後☁▩◕✘▩,錯誤裂解率有所降低☁▩◕✘▩,同時☁▩◕✘▩,可以鑑定出更多的多肽↟₪。


Tp

Lys-C

Lys-C+Tp

裂解位點

精氨suan和賴氨suan的C端

賴氨suan的C端

精氨suan和賴氨suan的C端

錯誤裂解率

(錯誤裂解所佔比例  )

多(8%)

很少(0%)

少(3%)

鑑定出的多肽數量

17

19

22

125-05061.jpg


胰蛋白mei(Tp)(圖 a)和賴氨醯肽鏈內切mei(Lys-C)+Tp( 圖 b)mei切後的質譜結果對照圖↟₪。

Lys-C+Tp mei切後☁▩◕✘▩,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰☁▩◕✘▩,而單獨的 Tp mei切在 m/z=2000 時沒有吸收峰↟₪。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度↟₪。

( 資料由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )

賴氨醯肽鏈內切mei

賴氨醯肽鏈內切mei☁▩◕✘▩,最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到↟₪。該mei可以特異性剪下賴氨suan殘基C末端和S-氨乙基半胱氨suan殘基的肽鍵☁▩◕✘▩,用於蛋白測序和 Lys-X 化合物的mei催化合成↟₪。該mei穩定性高☁▩◕✘▩,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小時之後☁▩◕✘▩,仍然擁有完整的生物活性↟₪。

外觀

 凍乾粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer☁▩◕✘▩,pH 8)

活性

 見包裝

分子量

 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE)

溶解性

 易溶於水或緩衝液

最佳pH

 9.0-9.5(醯胺mei的最佳活性 pH)

等電點

 6.9-7.0

抑制劑

DFP↟·││☁、PMSF↟·││☁、TLCK

來源

 細菌

穩定性

 溶於pH 值 5.0-12.0 的緩衝液中☁▩◕✘▩,可於4℃穩定儲存↟₪。溶於pH 值 6.0-11.0 的緩衝液中☁▩◕✘▩,可於30℃穩

 定儲存☁▩◕✘▩,但是50℃及以上不穩定↟₪。

單位定義

 一單位醯胺meiAU)指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol 對硝基苯胺所需的mei量↟₪。

底物特異性

 水解底物│▩·☁:Tos-Lys-Ome↟·││☁、Bz-Lys-NH2↟·││☁、Bz-Lys-pNA↟·││☁、Lys-pNA

 非水解底物│▩·☁:Bz-Arg-NH2↟·││☁、Bz-Arg-pNa↟·││☁、Arg-pNA

產品編號

產品名稱

產品規格

產品等級

Wako 125-05061

Lysyl Endopeptidase®, MS Grade
賴氨醯肽鏈內切mei☁▩◕✘▩,MS級

20 μg×5

質譜級

Wako,質譜級賴氨醯肽鏈內切酶


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